「 技术交流 」细胞及流式检测样本准备方法及要求
1.流式检测样本的收集、保存、运输方式及注意事项：
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样本形式 |
处理方式 |
运输 |
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血样 |
当天采集的血液，置于抗凝管中，建议血量≥2mL，单个血样对应分组较多时应适当加大采血量。 |
4小时之内完成淋巴细胞分离。 |
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组织 |
新鲜标本离体后置于PBS中，4℃保存运输。离体时间不可超过24小时。 |
4℃ |
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活细胞 |
武汉本地客户可以将培养细胞的孔板交予销售带至实验室，需要用封口膜密封，防止漏液。外地客户需将有活力的细胞置于培养瓶中常温快递至公司检测。使用不透气培养瓶培养细胞，待细胞汇合度达到70%左右时，灌满新鲜培养基至接近瓶口处，拧紧瓶盖，封口膜进一步封住瓶口。瓶身上做好标记（细胞名称，培养基，日期等）。打包时必需做防震处理。 |
常温 |
注意事项：
- 流式细胞样本量≥106个细胞，周期检测样本量≥107个细胞；
- 血液≥2ml。
2.其他检测样本的收集、保存、运输方式：
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检测形式 |
处理方式 |
保存 |
运输 |
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细胞周期检测 |
周期需要细胞量比较多，6孔板送样要求汇合度在70%，但不能超过90%。外地样品，需用预冷的70%乙醇固定过夜后，加2ml PBS，封口膜封好，4℃运输寄到实验室。如果运输时间较短（2天内可到），可直接加70%乙醇后寄过来。 |
-20℃ |
冰袋 |
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细胞凋亡检测 |
需要活细胞。如果细胞带荧光，一定要在交接单和培养板上备注，否则按照无荧光处理。如果因此导致检测结果不可用及样本浪费，我方概不负责，也不接受退单。将细胞正常消化后，PBS洗一遍，PBS重悬。 |
必须当天送样 |
冰袋 |
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Tunel细胞凋亡检测 |
有活力的细胞，弃去培养液，PBS冲洗后，加入足量4%多聚甲醛，培养板附上保鲜膜，盖上板盖，胶布缠裹固定，避免固定液体流出。 |
4℃ |
冰袋 |
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原代分离实验 |
无菌采取完整的组织块，新鲜组织离体后置于无菌培养基中。 |
离体时间不可超过4小时 |
冰袋 |
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血小板的分离 |
需要选择医用真空采血管获得抗凝血，全过程样本均需在20±2℃的条件下进行。为获得最佳的实验结果，最好在取血2h内进行实验，血液存放时间越长，细胞分离效果越差。血液放置超过6h后分离效果更差甚至不能达到分离目的。 |
4℃ |
冰袋 |
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流式JC-1 |
需要活细胞（外地样本不接）。细胞汇合度高于70%（6孔板），多提供2个空白孔，做阴性和阳性对照。如果细胞带红光或绿光，不能检测。 |
必须当天送样 |
常温 |
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流式ROS |
需要活细胞（外地样本不接）。细胞汇合度高于70%（6孔板），多提供2个空白孔，做阴性和阳性对照。如果细胞带绿光，不能检测。 |
必须当天送样 |
常温 |
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细胞表抗 |
提前确定公司是否有相应流式抗体（组化抗体不可用），其他抗体需要客户自己提供（外地样本不接）。 |
必须当天送样 |
常温 |
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流式三标 |
提前告知样本具体数量和类型（血液或脾脏~）。血样用抗凝管收集（胞内染色至少需要1.5 ml，表抗需要约1 ml），注意防止凝血，4℃保存运输。血样4℃保存最多只能存放一周，时间越久实验结果越差。取血后，需尽快寄到实验室；取脾脏时尽量将动物带到实验室，直接在实验室取材后开始实验，若不能将动物带到实验室，取材（整个脾脏）后将组织放在含有PBS的EP管或离心管中，4℃保存，提细胞必须在取材后6小时以内完成，注意有些检测指标（Treg,TH1, TH2等）需无菌提取。外地样本不接。 |
需尽快送到实验室。 |
冰袋 |
