「 技术交流 」分子检测样本准备方法及要求
1.普通PCR及Realtime PCR样本的收集、保存、运输方式及注意事项：
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样本形式 |
处理方式 |
保存 |
运输 |
可检测指标数 |
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新鲜组织 |
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液氮或-80℃ |
干冰 |
30-50 |
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细胞 |
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液氮或-80℃ |
干冰 |
20-30 |
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全血 |
1、大于等于2ml全血加入EDTA或肝素抗凝。 |
4℃ |
冰袋 |
30-50 |
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2、4h内进行淋巴细胞分离。 |
液氮或-80℃ |
干冰 |
询问 |
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体液 |
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液氮或-80℃ |
干冰 |
询问 |
注意事项：
1.组织在1-2min内完成取材，速冻，并立即放入-80℃或液氮中保存。
2.有条件的话，最好先将样本在液氮中速冻，再转入-80℃冰箱中保存。
3.使用的冻存管最好也用DEPC处理。
4.对于组织及细胞样本，如果没有液氮或-80℃冰箱，也可用RNAlater保存，但是组织一定要切成比较小的块状，-20℃保存运输。
2.Western Blot样本的收集、保存、运输方式及注意事项：
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样本形式 |
处理方式 |
保存 |
运输 |
可检测指标数 |
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新鲜组织 |
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液氮或-80℃ |
干冰 |
2-3 |
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细胞 |
每1×106个细胞（至少） 胰酶消化：吸去培养板内的培养基，用胰酶将细胞消化后，收集到15ml或者50ml离心管中，1500rpm离心3min，弃去上清；加入PBS轻轻吹打，1500rpm离心3min，弃去上清；反复3次，弃去上清后于-80度或者液氮冻存待用。在避免冻融的情况一般保存1年，建议尽快检测。 细胞刮子收集细胞：对于某些蛋白（即对胰酶比较敏感或者实验特殊要求，如E-Cadherin不易用胰酶消化后进行WB检测），直接用细胞刮子刮下细胞，收集到EP、15ml或者50ml离心管中，1500rpm离心3min，弃去上清；加入PBS轻轻吹打，1500rpm离心3min，弃去上清；反复3次，弃去上清后于-80度或者液氮冻存待用，建议尽快检测。
到15ml或者50ml离心管中，1500rpm离心3min，弃去上清；加入PBS轻轻吹打，1500rpm离心3min，弃去上清后于-80度或者液氮冻存待用。避免冻融，尽快检测。
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液氮或-80℃ |
干冰 |
2-3 |
注意事项：
1.组织样本在1-2min内完成取材，速冻，并立即放入-80℃或液氮中保存。
2.有条件的话，最好先将样本在液氮中速冻，再转入-80℃冰箱中保存。
3.对于心肝脾肾等组织可每50~100mg加1ml裂解液，肺100~200mg加1ml裂解液。加入裂解液前，尽量将组织剪成小块。
